Рәхмәт һеҙгә килгән өсөн Nature.com.Браузер версияһы һеҙ ҡулланған сикләнгән ярҙам CSS.Иң яҡшы тәжрибә өсөн, беҙ һеҙгә кәңәш итәбеҙ, яңыртылған браузер ҡулланырға (йәки һүндерергә совместимость режимы Internet Explorer).Шул арала, дауамлы ярҙам тәьмин итеү өсөн, беҙ сайтты күрһәтәсәк стилдәр һәм JavaScript.
Был эш лиофилизациялау һәм һиптереп киптереүҙең инсулин йөкләнгән хитозан нанокиҫәксәләре структураһына йоғонтоһон баһалауҙы маҡсат итеп ҡуя. Һыуһыҙландырыу, киҫәксәләр күләме хитозан/натрий триполифосфат/инсулин һылтанмалы нанокиҫәксәләр оптимальлаштырылған 318 нм, PDI 0,18, инкапсуляция һөҙөмтәлелеге 99,4%, һәм йөкләү 25,01%,һәм nanoparticles a,бөтә reconstitutions лиофилизациялау ысулы ҡулланмайынса маннит, уларҙы һаҡлап ҡалды сферик киҫәксәләр структураһы.Маннит содержащий нанокиҫәксәләр менән сағыштырғанда, йәки брызговик һыуһыҙландырылған, маннитһыҙ ransured киптерелгән нанокиҫәксәләр шулай уҡ иң бәләкәй уртаса киҫәксәләр күләме күрһәтте (376 нм) һәм иң юғары йөкләмәһе en2p2. (98,7%) һәм PDI (0,20) киптереп йәки лиофилизациялау ысулдары менән. Киптерелгән нанокиҫәксәләрҙе маннитһыҙ брызговик киптереп, шулай уҡ инсулиндың иң тиҙ сығарылыуы һәм күҙәнәктең иң юғары һөҙөмтәлелеге менән сағыштырырға мөмкин. лиофилизациялау ысулдары, ҙурыраҡ йөкләү ҡәҙерен булдырыу, түбән өҫтәмә талаптар һәм эксплуатация сығымдары һиҙелерлек өҫтөнлөк.
19221,2,3 йылда асылғандан алып, инсулин һәм уның фармацевтик препараттары 1-се типтағы шәкәр диабеты (Т1ДМ) һәм 2-се типтағы шәкәр диабеты (Т1ДМ) менән ауырығандар ғүмерен һаҡлап ҡалды. эффект.Кешеләр диагноз ҡуйылған тип 1 шәкәр диабеты кәрәк инсулин инъекциялар өсөн ҡалған ғүмерҙәре.Күп пациенттар тәүҙә диагноз ҡуйылған тип 2 шәкәр диабеты шулай уҡ оҙайлы инсулин инъекциялар талап итә. инсулин идаралығы, киң өйрәнелә5, сөнки улар бөтә донъяла шәкәр диабеты менән ауырыған яҡынса 5 миллиард кешенең тормош сифатын тергеҙеү мөмкинлегенә эйә.
Нанокиҫәксәләр технологияһы һиҙелерлек алға китеш тәьмин итте тырышлыҡтар ҡабул итеү перораль инсулин4,6,7.Бер, тип һөҙөмтәле инкапсулировать һәм һаҡлай инсулин деградация өсөн маҡсатлы тапшырыу өсөн аныҡ организм сайттары. кәметә биодоступность инсулин-йөкләнгән нанокиҫәксәләр8.Бынан тыш, химик тотороҡлолоҡ полимер матрицаһы нанокиҫәксәләр һәм инсулин шулай уҡ ҡарарға тейеш, тотороҡлолоҡто тәьмин итеү өсөн инсулин нанокиҫәксәләр (НП).Әлеге ваҡытта, лиофилизациялау технологияһы алтын стандарт булдырыу өсөн тотороҡло НП, шул уҡ ваҡытта unchangedra duchanged9.
Әммә лиофилизациянан һуң лиофилизациянан һуң инсулин нанокиҫәксәләренең йөкләмәһен һиҙелерлек кәметә, сөнки криопротектор инсулиндың күпселек өлөшөн биләй. ҡоро порошок формулировкаларын етештереү өсөн яраҡһыҙ, мәҫәлән, перораль таблеткалар һәм перораль пленкалар, инсулиндың дауалау тәҙрәһенә өлгәшеү өсөн күп күләмдә ҡоро нанокиҫәксәләр кәрәклеге арҡаһында.
Ҡоро порошоктар етештереү өсөн билдәле һәм арзан сәнәғәт масштабында процесы булып тора, фармацевтика сәнәғәтендә шыйыҡ фазаларҙан10,11.Контроль өҫтөндә киҫәксәләр барлыҡҡа килтереүҙең процесы дөрөҫ инкапсуляциялау мөмкинлеге бирә бер нисә биоактив берләшмәләр 12, 13 . перораль идара итеү өсөн капсулированный аҡһымдар.Дур брызговик киптереп, һыу бик тиҙ парлана, был температураны һаҡларға ярҙам итә киҫәксә ядроһы түбән11,14, уның ҡулланыу мөмкинлеген бирә, капсулировать йылылыҡҡа һиҙгер компоненттар. ингредиенттар11,14.Айырмалы рәүештә лиофилизациялау, гомогенизация алдынан инкапсуляция брызговик-киптереп яҡшырта инкапсулирование һөҙөмтәлелеге ваҡытында обезвоживание.Сөнки брызговик-киптереп инкапсуляция процесы криопротекторҙар талап итмәй, брызговик-киптереп етештереү өсөн ҡулланырға мөмкин юғары contenteda lo dri.
Был тикшеренеүҙең етештереү тураһында хәбәр инсулин-йөкләнешле НПС хитозан һәм натрий триполифосфаты ион гель ысулын ҡулланып һылтанма. Һыуһыҙландырыу өсөн оптималь хитозан/натрий триполифосфаты/инсулин аша үткән нанокиҫәксәләрҙе һыуһыҙландырыу өсөн. һыуһыҙландырыу ысулдары шулай уҡ уларҙы инсулин һаҡлау, сығарыу тәртибе һәм күҙәнәктәрҙең үҙләштереү һөҙөмтәлелеген сағыштырыу юлы менән баһаланды.
Ҡатнаш иретмә рН һәм хитозан һәм инсулин нисбәте ике төп фактор булып тора, улар киҫәксәләрҙең күләме һәм инкапсуляция һөҙөмтәлелегенә йоғонто яһай (ЕЭ) һуңғы НП, сөнки улар туранан-тура йоғонто яһай ионотропный гелирование процесы. 1а, рН 4,0 6,0 тиклем артты, уртаса киҫәксәләр күләме (нм) кәмене һәм ЕЭ һиҙелерлек артты, шул уҡ ваҡытта рН 6,5 тиклем артты, уртаса киҫәксәләр күләме арта башланы һәм ЕЭ үҙгәрешһеҙ ҡалды. Ҡасан нанокиҫәксәләр әҙерләнгән масса нисбәтендә хитозан/инсулин юғары 2,5:1 (мас./мас.) (һүрәт. 1б).Шуға күрә, был тикшеренеүҙең оптималь әҙерләү шарттары (рН 6,0, хитозан/инсулин масса нисбәте 2,5:1) был study әҙерләү өсөн ҡулланылған average әҙерләү өсөн инсулин-йөкләнгән na. киҫәксәләр күләме инсулин нанокиҫәксәләре оптималь булды 318 нм (һүрәт. 1в), PDI 0.18, встраивание һөҙөмтәлелеге 99.4%, зета потенциалы 9.8 мв, һәм инсулин йөкләү 25.01% (м/м ). сағыштырмаса бер тигеҙ ҙурлыҡтағы сферик һәм дискрет (1-се һүрәт, г).
Инсулин нанокиҫәксәләренең параметрҙарын оптималләштереү: (а) рН-дың инсулин нанокиҫәксәләренең уртаса диаметрына һәм инкапсуляция һөҙөмтәлелегенә (ЭЭ) йоғонтоһо (хитозан һәм инсулиндың 5:1 масса нисбәтендә әҙерләнгән); (б) хитозан һәм инсулиндың масса нисбәтенең уртаса диаметрына һәм инкапсуляция һөҙөмтәлелегенә йоғонтоһо (ЕЭ) инсулин НП-лары (рН 6 әҙерләнгән); в) оптималь инсулин нанокиҫәксәләренең киҫәксәләр ҙурлығы буйынса бүлелеше; (г) ТЭМ микрографияһы оптималь инсулин НПС .
Был яҡшы билдәле, хитозан көсһөҙ полиэлектролит менән рКа 6.5.It ыңғай зарядлы кислоталы мөхиттә, сөнки уның төп аминотөркөмө протонировать водород иондары15.Шуға күрә, ул йыш ҡына ташыусы булараҡ ҡулланыла, инкапсулировать тиҫкәре зарядлы макромолекулалар менән инсулин булды. изоэлектрик нөктәһе 5.3.Сөнки хитозан ҡаплау материалы булараҡ ҡулланыла, уның өлөшөн арттырыу менән, ҡалынлығы тышҡы ҡатлам нанокиҫәксәләр тейешле рәүештә арта, һөҙөмтәлә ҙурыраҡ уртаса киҫәксәләр күләме.Бынан тыш, юғары кимәлдә хитозан recapsuled мөмкин the caseto юғары инсулин беҙҙең инсулин булды. 2.5:1, һәм нисбәт арта барғанда ЭЭ-ла һиҙелерлек үҙгәрештәр булманы.
Хитозан һәм инсулин нисбәтенән тыш, рН шулай уҡ НПс әҙерләүҙә мөһим роль уйнай.Ган һ.б. 17 өйрәнелгән эффекты рН киҫәксәләр күләме хитозан нанокиҫәксәләр.Улар тапты өҙлөкһөҙ кәмеүе киҫәксәләр күләме тиклем рН еткән 6,0, һәм һиҙелерлек артыу киҫәксәләр күләме күҙәтелде рН > 6,0, был беҙҙең күҙәтеүҙәр менән тура килә. заряд, шулай итеп, хитозан менән электростатик үҙ-ара тәьҫир итешеү яҡлы/натрий триполифосфаты (ТЭП) комплексы, һөҙөмтәлә бәләкәй киҫәксәләр күләме һәм юғары ЕЭ .Әммә, ҡасан рН 6.5 көйләнгән, хитозан өҫтөндә аминотөркөмдәр депротонировать, һөҙөмтәлә хитозан юғары рН инсулин ҡатлау мин . һөҙөмтәлә түбән һылтанма, ҙурыраҡ һуңғы уртаса киҫәксәләр ҙурлығы һәм түбән ЭЭ.
Морфологик үҙенсәлектәрен анализлау лиофилизацияланған һәм брызговик-киптерелгән НПС һайлау етәкселек итә ала яҡшыраҡ обезвоживание һәм порошок барлыҡҡа килтереүҙең техникаһы.Өҫтөнлөк бирелгән ысул препарат тотороҡлолоғон тәьмин итергә тейеш, берҙәм киҫәксә формаһында, юғары препарат йөкләмәһе һәм яҡшы эретелгәнлек тәүге иретмәлә.Был тикшеренеүҙең, яҡшыраҡ сағыштырыу өсөн, инсулин менән ике% NPs1. маннит һыуһыҙландырыу ваҡытында ҡулланылған.Маннит агент булараҡ ҡулланыла йәки криопротектор төрлө ҡоро порошок формулировкалары өсөн лиофилизациялау һәм брызговик киптереү.Фор лиофилизацияланған инсулин нанокиҫәксәләр өсөн маннитһыҙ, 2а һүрәтендә күрһәтелгәнсә, юғары пористый порошок underscolar структураһы менән ҙур, surfa (SEM).Бер нисә дискрет киҫәксәләр асыҡланды порошок һыуһыҙландырыуҙан һуң (һүрәт. 2д).Был һөҙөмтәләр күрһәткәнсә, күпселек НП-лар лиофилизациялау ваҡытында тарҡала, бер ниндәй ҙә криопротектантһыҙ. 2б,г,е,з).Инсулин нанокиҫәксәләре брызговик-киптерелгән маннитһыҙ ҡалды сферик, әммә өҫтөндә йыйырсыҡлы (һүрәт. 2в).Сферик һәм йыйырсыҡлы өҫтө артабан фекер алышыу тәртибе һәм күҙәнәк ҡабул итеү һынауҙары түбән.Күренеп торған dNPs appear маннитһыҙ һәм НП-ларһыҙ лиофилизацияланған һәм маннит менән брызговик менән киптерелгән ваҡ НП-лар порошоктары бирә (һүрәт. 2f,g,h).Киҫәксәләр өҫтө араһындағы ер өҫтө майҙаны ни тиклем ҙурыраҡ булһа, эретелгәнлек шул тиклем юғарыраҡ һәм, тимәк, тиҙлекте сығарыу юғарыраҡ.
Төрлө һыуһыҙландырылған инсулин НП-ларының морфологияһы: (а) маннитһыҙ лиофилизацияланған инсулин НП-ларының СЭМ һүрәте; (б) маннит менән лиофилизацияланған инсулин НП-ларының СЭМ һүрәте; (в) брызговик-киптерелгән инсулин НПС маннитһыҙ SEM һүрәте ; (d) SEM һүрәте инсулин NPs брызговик-маннит менән киптерелгән; д) маннитһыҙ лиофилизацияланған инсулин НПС порошогы һүрәте; е) маннит менән лиофилизацияланған инсулин НП-ларының һүрәте; ( ж) һүрәте брызговик-киптерелгән инсулин NPs порошок маннитһыҙ; (з) һүрәте брызговик-киптерелгән инсулин NPs порошок менән маннит.
Лиофилизация ваҡытында маннит криопротектор булып эшләй, НП-ларҙы аморф формала тота һәм боҙ кристалдары тарафынан зыян килтереүҙе иҫкәртергә ярҙам итә. һүрәтләнгән.Әммә, маннит һаман да тултырғыс булып сығыш яһай ала брызговик-киптереүҙең процесында бирергә НПС күберәк сферик структура20 (һүрәт. 2d), был ярҙам итә, берҙәм рөхсәт тәртибе алыу өсөн бындай инкапсулированный НПС.Бынан тыш, был асыҡ, тип ҡайһы бер ҙур киҫәксәләр асыҡлана ала freeth инсулин-spdrize insulin-ray . маннит (һүрәт 2б,г), был манниттың киҫәксә үҙәгендә капсулаға һалынған инсулин менән бергә тупланыуы менән бәйле булыуы мөмкин. To.Hitosan layer.It иғтибарға лайыҡ, был тикшеренеүҙе тәьмин итеү өсөн, сферик структураһы һыуһыҙландырыуҙан һуң бөтөн булып ҡала, маннит һәм хитозан нисбәте һаҡлана 5:1, шулай итеп, ҙур күләмдә тултырғыс шулай уҡ киҫәксәләр күләмен ҙурайтырға мөмкин киптерелгән НП..
Фурье трансформацияһы инфраҡыҙыл зәғифләнгән дөйөм сағылдырыу (ФТИР-АТР) спектроскопияһы характеристика физик ҡатнашмаһы ирекле инсулин, хитозан, хитозан, ТЭП һәм инсулин. 3-сө һүрәттә. Алдан хәбәр ителгәнсә, был ныҡлыҡтың артыуы хитозан, ТЭП һәм инсулин араһындағы һылтанма менән бәйле булған. 1641 см-1 һәм амин (1543 см-1) билбауын арттырыусы инсулиндың интенсивлығын арттыра.
ФТИР-АТР спектрҙары ирекле инсулин, хитозан, физик ҡатнашмалар хитозан/ТПП/инсулин һәм НП-лар төрлө ысулдар менән һыуһыҙландырылған.
Бынан тыш, был һөҙөмтәләр менән тура килә, күрһәтелгән SEM, был күрһәткән, тип инкапсулированный НП-лар бөтөн булып ҡалды, ҡасан да һиптереп һәм маннит менән лиофилизацияланған, әммә маннит булмағанда, тик һиптереп-киптереп етештереү similared киҫәксәләр булды. хитозан, ТЭП һәм инсулиндың физик ҡатнашмаһына. Был һөҙөмтә хитозан, ТЭП һәм инсулин араһындағы бәйләнештәрҙең маннитһыҙ лиофилизацияланған НП-ларҙа юҡлығын күрһәтә. һыуһыҙланған инсулин НП-лары, тик лиофилизацияланған, һиптереп киптерелгән һәм маннитһыҙ НП-лар ғына тергеҙеү тәжрибәләре өсөн һәм һыуһыҙландырыу ваҡытында маннитһыҙ НП-лар тарҡалыу сәбәпле маннитһыҙ НП-лар ҡулланылған. телгәрергә.
Һыуһыҙландырыу өсөн ҡулланыла оҙайлы һаҡлау һәм башҡа формулировкаларға ҡабаттан эшкәртергә. Ҡоро НП-ларҙы һаҡлауҙан һуң тергеҙеү мөмкинлеге уларҙы төрлө формулировкаларҙа ҡулланыу өсөн үтә мөһим, мәҫәлән, таблеткалар һәм пленкалар. 1-се таблицала был тикшеренеүҙең бөтә НП-ларын рекомбинациялауҙан һуң PDI һәм EE һиҙелерлек үҙгәрмәне (р > 0,05). лиофилизацияланған һәм брызговик менән киптерелгән маннит нанокиҫәксәләрен йөкләү (1-се таблица).
Был яҡшы билдәле, тип йөкләү нанокиҫәксәләр тәнҡитле ҡасан ҡулланыла препараттар тапшырыу маҡсатында.Түбән йөкләмәләр менән НП, бик ҙур күләмдә материал талап ителә, дауалау сигенә етеү өсөн. .Бынан тыш, инсулин НПС шулай уҡ таблеткалар һәм йәбешкәк биопленкалар эшләү өсөн ҡулланырға мөмкин23, 24, был ҙур күләмдә ҡулланыуҙы талап итә НПС түбән йөкләү кимәлендә, һөҙөмтәлә ҙур таблеткалар һәм ҡалын биопленкалар, улар өсөн яраҡлы түгел, перораль ҡушымталар.Шуға күрә, обезвоживание НПС юғары инсулин менән юғары desirablely һөҙөмтә тәҡдим итә. маннитһыҙ брызговик-киптерелгән НП был альтернатив тапшырыу ысулдары өсөн күп ылыҡтырғыс өҫтөнлөктәр тәҡдим итә ала.
Бөтә һыуһыҙландырылған НП һыуытҡыста өс ай һаҡланды.SEM һөҙөмтәләре күрһәтеүенсә, морфологияһы бөтә һыуһыҙландырылған НП өс ай һаҡлау ваҡытында һиҙелерлек үҙгәрмәй (һүрәт. 4).Һыуҙа тергеҙеүҙән һуң, бөтә НП әҙ генә кәмеүен күрһәтте һәм EE һәм өс du~mon инсулиндың бәләкәй-mon) сығарылған. һаҡлау осоро (таблица 2).Әммә, уртаса киҫәксәләр күләме бөтә нанокиҫәксәләр артты.Киҫәксәләр күләме НПС маннитһыҙ брызговик-киптерелгән 525 нм тиклем артты, ә был брызговик-киптерелгән һәм лиофилизацияланған НПС маннит менән 872 һәм 921 нм тиклем артты (respectively2T).
Өс ай һаҡланған төрлө һыуһыҙландырылған инсулин НП-ларының морфологияһы: (а) маннит менән лиофилизацияланған инсулин НП-ларының СЭМ һүрәте; (б) маннитһыҙ брызговик менән киптерелгән инсулин нанокиҫәксәләренең СЭМ һүрәте; (в) маннитһыҙ СЭМ һүрәттәре брызговик-киптерелгән инсулин НП.
Бынан тыш, яуым-төшөмдәр күренде тергеҙелгән инсулин нанокиҫәксәләре маннит менән брызговик-киптерелгән һәм лиофилизацияланған (һүрәт. S2).Был ҙур киҫәксәләр сәбәпле булыуы мөмкин, һыуҙа дөрөҫ туҡтатылмаған. нанокиҫәксәләрҙе бер ниндәй ҙә тултырғыстарһыҙ һәм криопротекторҙарһыҙ алырға мөмкин.
Инсулин тотоу тикшерелгән рН = 2.5 уртаса пепсин менән, трипсин, һәм α-химотрипсин күрһәтеү өсөн һаҡлау һәләтен күрһәтеү өсөн НПС ферментлы аш һеңдереүҙән һуң дегидратация.Инсулин тотоу дегидратацияланған НПС менән сағыштырылған, тип яңы әҙерләнгән НПС, һәм ирекле инсулин тиҫкәре инсулин был studymin күрһәтеү булараҡ ҡулланылған. сәғәт эсендә бөтә өс ферментлы дауалау (һүрәт. 5а–в).Уның ҡарауы, инсулин бөтөрөү һынау НПС лиофилизацияланған маннит һәм НПс брызговик-киптерелгән йәки маннитһыҙ был НПС ферментлы аш һеңдереүҙән һиҙелерлек юғары һаҡлау күрһәтте, был яңы әҙерләнгән NPsfigure1th оҡшаш булды). 50%, 60% һәм 75% инсулиндың 4 сәғәт эсендә һаҡлана ала, ярашлы рәүештә (һүрәт. 5а–в). маннит менән лиофилизациялау һыуһыҙландырғандан һуң НП-ларҙы инсулиндан һаҡлау һәләтен һаҡлап ҡала ала.
Һаҡлау һәм һыуһыҙландырылған инсулин НП-ларын сығарыу тәртибе: (а) пепсин иретмәһендә инсулинды һаҡлау; б) трипсин иретмәһендә инсулинды һаҡлау; в) инсулинды α-химотрипсин иретмәһе менән һаҡлау; ( г) рН = 2,5 иретмәһендә һыуһыҙландырылған НП-ларҙы сығарыу тәртибе; д) рН = 6,6 эретмәлә һыуһыҙландырылған НП-ларҙы сығарыу тәртибе; е) рН = 7,0 эретмәлә һыуһыҙландырылған НП-ларҙы сығарыу тәртибе.
Яңы әҙерләнгән һәм тергеҙелгән ҡоро инсулин НП-ларын 37 °C температурала төрлө буферҙарҙа (рН = 2,5, 6,6, 7,0) инкубациялайҙар, ашҡаҙан, ун ике эсәк һәм өҫкө ваҡ эсәктең рН мөхитен моделләштерәләр, инсулиндың инсулинға ҡаршы тороусанлыҡҡа йоғонтоһон тикшерәләр. Төрлө мөхиттә тәртипте сығарыу.Фрагмент ашҡаҙан-эсәк юлдары.Ат рН = 2.5, инсулин-йөкләнгән НП һәм резолюбилизацияланған ҡоро инсулин НП күрһәткән тәүге ярсыҡ сығарыу эсендә тәүге бер сәғәт, артабан яйлап сығарыу өҫтөндә киләһе 5 сәғәт кеүек rapgid иң rapidT булырға raply һөҙөмтәһе). ер өҫтө десорбцияһы аҡһым молекулалары, улар тулыһынса иммобилизацияланмаған эске структураһында киҫәксә.Ат рН = 6.5, инсулин-йөкләнгән НП һәм ҡоро инсулин НП тергеҙелгән тигеҙ һәм яй ғына 6 сәғәт эсендә сығарыу күрһәтте, сөнки рН һынау иретмәһе оҡшаш булды, тип НП һәм рН5-әҙерләнгән иретмә). тәүге ике сәғәт эсендә тулыһынса тиерлек тарҡала (һүрәт 5е).Был хитозандың депротонлашыуы юғары рН-да бара, һөҙөмтәлә полимер селтәре әҙерәк тығыҙлана һәм тейәлгән инсулин сығарыла.
Бынан тыш, инсулин НПС брызговик-киптерелгән маннитһыҙ тиҙ генә сығарыу профиле күрһәтте, башҡа һыуһыҙландырылған НПС (һүрәт. 5d–f).Алдан һүрәтләнгәнсә, маннитһыҙ киптерелгән инсулин НПС иң бәләкәй киҫәксәләрҙе күрһәтте иң бәләкәй киҫәксәләр күләме. өҫтө, һөҙөмтәлә тиҙ наркотиктар сығарыу26.
Цитотоксичность НП тикшерелгән МТТ assay.As күрһәтелгән һүрәттә S4, бөтә һыуһыҙландырылған НП асыҡланды, күҙәнәктәрҙең йәшәүсәнлегенә һиҙелерлек йоғонто яһамай концентрацияһы 50-500 мкг/мл, тип фаразлай, бөтә һыуһыҙландырылған НП хәүефһеҙ ҡулланырға мөмкин, тип фаразлай, терапевтик тәҙрәгә етеү өсөн.
Бауыр - төп ағза, улар аша инсулин үҙенең физиологик функцияларын башҡара. мкг/мл концентрацияһында ирекле ФИТК инсулин менән бер нисә сәғәт инкубациянан һуң лазерлы сканерлау һәм тигеҙ концентрацияла инсулин тейәлгән НП һәм дегидратацияланған ФИТК инсулин менән йөкләнгән НП миҡдар микроскопияһы (CLNPyoformed) күҙәтеүҙәре булды. һыуһыҙландырыу ваҡытында юҡ ителгән һәм был һынауҙа баһаланмаған.Яңы әҙерләнгән инсулин тейәлгән НП-лар, маннит менән лиофилизацияланған НП-лар, маннит менән һәм маннитһыҙ брызговик-киптерелгән НП-лар күҙәнәк эсендәге флуоресценция интенсивлығы (һүрәт. 6а) 4,3, 2,6, 2,4 the freesulin-4ld. төркөмө, ярашлы рәүештә (һүрәт. 6б).Был һөҙөмтәләр капсулированный инсулин күҙәнәктәрҙең үҙләштереүендә ирекле инсулинға ҡарағанда көслөрәк булыуын күрһәтә, башлыса тикшеренеүҙең етештерелгән инсулин йөкләнгән нанокиҫәксәләрҙең бәләкәйерәк күләме арҡаһында.
сәғәттән һуң инкубациянан һуң HepG2 күҙәнәктәре ҡабул итеү яңы әҙерләнгән NPs һәм дегидратацияланған NPs: (а) таралыу FITC-инсулин ҡабул итеү HepG2 күҙәнәктәре.
Шулай уҡ, CLSM һүрәттәре күрһәтеүенсә, FITC флуоресценция интенсивлығы яңы әҙерләнгән FITC-инсулин-йөкләнгән НП һәм FITC-инсулин-йөкләнгән брызговик-киптерелгән НП (маннитһыҙ) башҡа өлгөләргә ҡарағанда күпкә көслөрәк булған (һүрәт. 6а). Ҡаршылыҡ күҙәнәктәр ҡабул итеү, һөҙөмтәлә кәмегән инсулин пролиферацияһы.Был һөҙөмтәләр маннитһыҙ брызговик-киптерелгән НП күрһәткән иң юғары күҙәнәк ҡабул итеү һөҙөмтәлелеге, сөнки уларҙы киҫәксәләр күләме бәләкәй булған, тип лиофилизацияланған НП ҡабаттан иретелгәндән һуң.
Хитозан (уртаса молекуляр ауырлығы 100 КДа, 75–85% деацетилированный) һатып алынған Сигма-Олдрич.(Оаквилл, Онтарио, Канада).Натрий триполифосфаты (ТПП) һатып алынған VWR (Раднор, Пенсильвания, АҠШ). АҠШ).Флуоресцеин изотиоцианат (FITC)-маркировкаланған кеше инсулины һәм 4′,6-диамидино-2-фенилиндол дигидрохлорид (DAPI) һатып алынған Сигма-Ольдрич.(Оквилл, Онтарио, Канада).
мг/мл CS иретмәһен әҙерләү, уны ике тапҡыр дистиллированный һыуҙа иретергә (ДД һыу) составында 0,1% сироп кислотаһы.Әҙерләү 1 мг/мл иретмәләр ТПП һәм инсулин, уларҙы иретергә DD һыу һәм 0,1% сироп кислотаһы, соответственно.Предварительный а-CU-трон әҙерләнгән1 s2. гомогенизатор (Brinkmann Ind. Вестбери, Нью-Йорк, АҠШ).Әҙерләү процесы түбәндәгесә: беренсенән, 2мл ТЭП иретмәһе өҫтәлгән 4мл инсулин иретмәһе, һәм ҡатнашма 30мин һәм тулыһынса ҡатнаштырылған. (10,000 rpm).Ҡатнашмалар аҫтында һаҡланған юғары тиҙлектә болғатыу (15,000 rpm) боҙ ваннаһында 30 минут, һәм улар билдәле рН алыу өсөн көйләнгән инсулин NPs. ванна ҡулланып зонд типтағы ультразвук (UP 200ST, Хильшер Ультратауыш, Тельтоу, Германия).
Инсулин NPS өсөн тикшерелгән Z-уртаса диаметры, полидисперсность индексы (PDI) һәм зета потенциалы ҡулланып динамик яҡтылыҡ һибеү (DLS) үлсәүҙәр ҡулланып Litesizer 500 (Антон Паар, Грац, Австрия) уларҙы DD һыуҙа һыуытып 25°C.Морфология һәм ҙурлыҡ бүленә H00. (ТЭМ) (Хитачи, Токио, Япония), һәм һүрәттәр артабан анализланды, Hitachi һүрәтләү программа тәьминәте ҡулланып (Hitachi, Токио, Япония). 500 хг өсөн 30 мин.Некапсулированный инсулин фильтрат ҡулланып, һанлаштырылған Agilent 1100 серияһы ВЭЖХ системаһы (Agilent, Санта-Клара, Калифорния, АҠШ) дүртенсе насос, автопробирка, колонка йылытҡыс, һәм DAD детекторы.Инсулин анализланған а, C8xn. 4.6 мм × 150 мм, Agilent, АҠШ) һәм 214 нм асыҡланған.Күсмә фаза ацетонитрил һәм һыу булды, составында 0.1% ТФА, градиент нисбәттәре 10/90 100/0, һәм 10 минут температураһы. °C ҡуйылған.Иҫәпләү проценттары EE һәм LC тигеҙләмәләр ҡулланып.(1) һәм Eq.(2).
Төрлө CS/инсулин нисбәттәре диапазоны 2.0 4.0 тиклем тикшерелгән оптимизациялау өсөн инсулин NP.Төрлө күләмдә CS иретмәһе әҙерләү ваҡытында өҫтәлде, шул уҡ ваҡытта инсулин/ТПП ҡатнашмаһы даими һаҡланды. ТЭП һәм CS).EE һәм киҫәксәләр күләме инсулин нанокиҫәксәләре төрлө рН ҡиммәттәре һәм CS/инсулин масса нисбәте баһаланды, инсулин NPs барлыҡҡа килтереүҙе оптимальлаштырыу өсөн.
Оптималь инсулин НПС алюминий һауытҡа урынлаштырылған һәм ҡайһы бер таҫма менән тығыҙланған туҡыма менән ҡапланған.Артабан, винтовкалы һауыттар Labconco FreeZone лиофилизацияға урынлаштырылған (Labconco, Канзас-Сити, MO, АҠШ) өсөн лоток киптергес менән йыһазландырылған.Температура һәм вакуум10 булды. тәүге 2 сәғәт, һәм 0 °C һәм 0,120 Торр өсөн ҡалған 22 сәғәт 24 сәғәт ҡоро инсулин НП алыу өсөн.
Бучи мини-брызговик киптергес В-290 (BÜCHI, Flawil, Швейцария) генерациялау өсөн ҡулланылған капсулированный инсулин.Һайланған киптереп параметрҙары булды: температура 100 °C, аҙыҡ ағымы 3 л/мин, һәм газ ағымы 4 л/мин.
100 спектрофотометр спектрофотометры (ПеркинЭльмер, Уолтем, Массачусетс, АҠШ) ярҙамында һыуһыҙландырыуға тиклем һәм унан һуң характеристика бирелгән FTIR-ATR спектроскопияһы. сканерлауҙан 4000-600 см2 йышлыҡ диапазонында 4 см2 асыҡлыҡта сигнал уртаса алынған.
Ҡоро инсулин НП-ларының морфологияһы Helios NanoLab 650 фокуслы ион нурлы сканерлау электрон микроскобы (FIB-SEM) (FEI, Хиллсборо, Орегон, АҠШ) ярҙамында төшөрөлгән лиофилизацияланған һәм брызговик менән киптерелгән инсулин НП-ларының СЭМ һүрәттәре ярҙамында баһаланды. Ҡулланылған төп параметр көсөргәнеш 5 кеВ һәм ток 30 мА булған.
Бөтә һыуһыҙландырылған инсулин НП-лар dd һыуҙа ҡабаттан эретелгән.Киҫәксәләр күләме, ПДИ, ЕЭ һәм ЖК ҡабаттан тикшерелгән, шул уҡ ысулды ҡулланып, уларҙы баһалау өсөн алда телгә алынған сифаты һыуһыҙландырыуҙан һуң. һыуытҡыста өс ай һаҡлана.Өс ай һаҡланғандан һуң, НП-лар морфологик киҫәксәләр күләме, ПДИ, ЕЭ һәм ЛК буйынса тикшерелгән.
мл ҡабаттан ҡатнаштырылған НП-ларҙы 45 мл составында моделләштерелгән ашҡаҙан шыйыҡсаһы (рН 1,2, составында 1% пепсин), эсәк шыйыҡсаһы (рН 6,8, составында 1% трипсин) йәки химотрипсин иретмәһендә (100 г/мл, фосфат инсулин еvaluat е. 100 rpm.500 мкл иретмә төрлө ваҡыт нөктәләрендә йыйылған һәм инсулин концентрацияһы ВЭЖХ ярҙамында билдәләнгән.
Яңы әҙерләнгән һәм һыуһыҙландырылған инсулин НП-ларының in vitro диализ ҡапсыҡ ысулы менән тикшерелде (молекуляр ауырлыҡ ҡырҡып 100 кДа, Spectra Por Inc.). тоҙло һыу, PBS) рН мөхитте моделләштереү өсөн ашҡаҙан, ун ике эсәк, һәм өҫкө ваҡ эсәк, ярашлы рәүештә.Бөтә өлгөләр инкубацияланған 37 °C өҙлөкһөҙ ҡалтыраныу менән 200 rpm.Аспирация шыйыҡса тышында 5 мл диализ ҡапсыҡ түбәндәге ваҡытта: ,1 ,3 , һәм 6 . тиҙ арала күләмен яңы диализат менән тулыландырыу.Шыйыҡсалағы инсулиндың бысраныуын ВЭЖХ ярҙамында анализлағандар, ә нанокиҫәксәләрҙән инсулиндың сығарыу тиҙлеге нанокиҫәксәләрҙә капсулаға һалынған ирекле инсулиндың сығарылған нисбәтенән иҫәпләнгән (3-сө тигеҙләмә).
Кеше гепатоцеллюляр карцинома күҙәнәк һыҙығы HepG2 күҙәнәктәре үҫтерелгән 60 мм диаметрлы һауыт-һаба ҡулланыу Дульбекко’s Модификацияланған бөркөт’s уртаса (DMEM) составында 10% һыйыр ҡан һыуытҡысы ҡорһаҡ, 100 МЕ/мл пенициллин, һәм 100 мкг/мл стрептоулцин at39C булды. 95% сағыштырмаса дымлылыҡ, һәм 5% CO2.Ҡабул итеү өсөн анализдар, HepG2 күҙәнәктәре 1 × 105 күҙәнәктәр/мл өҫтөнә 8-скважина Nunc Lab-Tek камера слайд системаһы (Термо Фишер, Нью-Йорк, АҠШ). тығыҙлығы 5 × 104 күҙәнәк/мл.
МТТ анализ ҡулланылған баһалау өсөн цитотоксичность яңы әҙерләнгән һәм һыуһыҙландырылған инсулин NPs30.HepG2 күҙәнәктәре 96-скважина пластинкалар тығыҙлығында 5 × 104 күҙәнәк/мл һәм культуралы 7 көн тикшергәнгә тиклем концентрацияһы. сәғәт инкубациянан һуң күҙәнәктәрҙе 3 тапҡыр ПФС менән йыуып, өҫтәмә 4 сәғәт дауамында 0,5 мг/мл МТТ составындағы мөхит менән инкубациялайҙар. спектрофотометрының Tecan сикһеҙ M200 pro пластинка уҡыусыһы (Tecan, Меннедорф, Швейцария).
Күҙәнәктәрҙең үҙләштереү һөҙөмтәлелеге НПС конфокаль лазерлы сканерлау микроскопияһы һәм ағым цитометрияһы анализы ярҙамында тикшерелде. сәғәт дауамында инкубациялана. Күҙәнәктәр 3 тапҡыр PBS менән йыуыла һәм 4% параформальдегид менән нығытыла.Ядролар 4′,6-диамидино-2-фенилиндол (DAPI) менән буялған. Ҡала, Токио, Япония).Анализ өсөн ағым цитометрияһы, шул уҡ концентрацияһы 10 мкг/мл ирекле FITC-инсулин, FITC-инсулин-йөкләнгән НП, һәм резолюбилизированный дегидратированный FITC-инсулин НП өҫтәлде 96-скважина пластинкалар менән орлоҡ HepGA hof4 hof4 өсөн күҙәнәктәр һәм 4. инкубация, күҙәнәктәрҙе сығарып, йыуып 3 тапҡыр FBS.5 × 104 күҙәнәктәр өлгөһө анализланған BD LSR II ағым цитометры (BD, Франклин күлдәре, Нью-Джерси, АҠШ).
Бөтә ҡиммәттәр уртаса ± стандарт тайпылыш тип күрһәтелә.Бөтә төркөмдәр араһында сағыштырыуҙар бер яҡлы ANOVA йәки t-тест ҡулланып баһаланды IBM SPSS Statistics 26 Mac өсөн (IBM, Endicott, Нью-Йорк, АҠШ) һәм p <0.05 статистик әһәмиәтле тип иҫәпләнде.
Был тикшеренеүҙең һығылмалылығы һәм мөмкинлектәрен күрһәтә брызговик киптереп һыуһыҙландырыу өсөн хитозан/ТЭП/инсулин нанокиҫәксәләре менән яҡшыраҡ тергеҙеү стандарт лиофилизациялау ысулдары менән сағыштырғанда, агенттар йәки криопротекторҙар ҡулланыу оптимальный агенттар йәки криопротектанттар ҡәҙерле һәм юғары йөкләмәләр ҡәҙере һәм оптималь инсулин sideparticlem1. 99,4% инкапсуляция һөҙөмтәлелеге.SEM һәм FTIR һөҙөмтәләре һыуһыҙландырыуҙан һуң күрһәткәнсә, сферик структура тик маннит менән һәм маннитһыҙ спрей-киптерелгән НП-ларҙа ғына һаҡлана һәм маннит менән лиофилизацияланған, әммә лиофилизацияланған НП-лар маннитһыҙ test-insulinconstitution withhydration.In the reconstitution. маннит күрһәткән иң бәләкәй уртаса киҫәксәләр күләме һәм иң юғары йөкләмәләр өҫтөндә тергеҙеү.Бөтә был һыуһыҙландырылған НП-ларҙы сығарыу тәртибе күрһәтте, улар тиҙ рН = 2,5 һәм рН = 7 иретмәләрендә сығарыла, һәм бик тотороҡло иретмәлә рН = 6,5. тиҙ релиз.Был һөҙөмтә тура килә, тип күҙәтелгән күҙәнәк ҡабул итеү анализ, сөнки брызговик-киптерелгән НПС булмағанда маннит тулыһынса тиерлек күҙәнәк ҡабул итеү һөҙөмтәлелеген һаҡлап ҡалды яңы әҙерләнгән НПС. һыуһыҙ дозировка формалары, мәҫәлән, перораль таблеткалар йәки биоадгезив пленкалар.
Интеллектуаль милек мәсьәләләренә бәйле, ағымдағы тикшеренеүҙең барышында генерацияланған һәм/йәки анализланған мәғлүмәттәр йыйылмаһы йәмәғәтселек өсөн асыҡ түгел, әммә тейешле авторҙарҙан нигеҙле үтенес буйынса алынырға мөмкин.
2-се типтағы шәкәр диабеты: социаль һәм фәнни сығышы, медицина ҡатмарлыҡтары һәм пациенттар һәм башҡалар өсөн эҙемтәләр.(Макфарлейн, 2009).
Сингх, А.П., Гуо, Ю., Сингх, А., Сяо, У. & Цзян, П. Инсулин инкапсуляция үҫеше: перораль идара итеү хәҙер мөмкинме?Дж. Аптека.био-аптека.резервуар.1, 74–92 (2019).
Вонг, CY, Аль-Салами, H. & Дасс, CR Һуңғы ваҡытта перораль инсулин-йөкләнгән липосома тапшырыу системалары өсөн алға китеш шәкәр диабеты дауалау.Интерпретация.J. Аптека.549, 201–217 (2018).